填料：硅膠表面共價鍵合 α1-酸性糖蛋白

粒徑：5μm

接口：Waters type

出廠保存溶劑：水/異丙醇 (85/15 v/v)

操作條件：

說明：HPLC 規(guī)格的壓力內操作，色譜柱填料穩(wěn)定。

          給定柱溫下，柱后壓與流速是線性關系。

          對于一些難分離的對映體，推薦使用更長的色譜柱。

       *1 使用該類規(guī)格的色譜柱時，應盡量優(yōu)化 HPLC 色譜儀（降低柱外體積），減小死體積。

       *2 使用比推薦溫度更高的柱溫，會影響色譜柱使用壽命。

操作過程：

• 流動相起始條件

• 緩沖溶液配制 – 舉例

• 10mM 乙酸銨緩沖液配制 (1L)：

  1. 稱取 770.8 mg 乙酸銨 (CH3COONH4，純度 > 99%) 至燒杯中。

  2. 加入 800mL 色譜級水來溶解該鹽，室溫下(20-25℃)放置一段時間。

  3. 使用經稀釋的乙酸或氨水來調節(jié) pH 值至目標值。

  4. 將溶液用 0.22µm 濾膜過濾到有刻度的容量瓶中。

  5. 加水至容量瓶滿刻度線，蓋好瓶塞搖動，使溶液混合均勻。

  如果緩沖溶液需要與有機相混合，通常按體積比混合的，zui 好選擇有刻度的容量瓶或移液管來量取。

  混合后，將流動相放置在超聲儀中超聲脫氣。

  注：如果要在流動相中加添加劑，添加劑需在調節(jié) pH 值前加入。

• 流動相

微生物在不含或含低比例有機相的流動相中較易滋生。這樣的流動相需現(xiàn)配現(xiàn)用。

• 緩沖溶液

通常地，乙酸銨緩沖液的濃度是10-20mM，zui 高是100mM。也可以使用其他緩沖溶液，比如磷酸鈉或磷酸鉀溶液，乙酸鈉溶液，甲酸鹽或檸檬酸鹽溶液。注意，用LC-MS檢測時，要選擇適合的緩沖溶液。

• 有機相

異丙醇是zui 常用的，除此之外，還有甲醇、乙醇和乙腈。這些有機溶劑的洗脫強度順序是：異丙醇＞乙醇≥乙腈＞甲醇。

• 添加劑

陽離子和陰離子添加劑，如 N,N-二甲基正辛胺（DMOA）、三*乙酸（TFA）、辛酸（OA）、七氟丁酸（HFBA）、可少量（≤10mM）添加在流動相中以改善保留和立體選擇性。但是，有些添加劑會強吸附在填料上，難以wan 全洗脫下來，色譜柱的分離能力會因此受到影響。

注意: 辛酸（OA）和二甲基正辛胺（DMOA）在水中的溶解度很低，室溫下只能溶解到 2mM 辛酸（OA）或 5mM 二甲基正辛胺（DMOA）的濃度。高于該濃度就會引起溶液分層。

流動相中一旦使用了添加劑，該色譜柱就 必 須 專 柱 專 用。

• 樣品

樣品進樣量應盡量小。建議濃度在0.2mg/mL以下，進樣體積 5-10 μL。

盡量用流動相來溶解樣品。如果不能溶解，可適當增加有機相的比例。樣品溶液需經近似0.5µm濾膜過濾以確保使用前無沉淀。

注意: 樣品用100. %或高比例的有機相溶解可能會導致在線析出。 

        化合物沒有wan 全溶解不能進樣。 

色譜柱保養(yǎng)/維護：

• 為延長柱子使用壽命，強烈建議使用保護柱。

• 如果色譜柱被一些疏水性的雜質污染，可將色譜柱反接（不連接檢測器），用水/異丙醇 75/25（v/v）低流速沖洗過夜（例如，4mm 內徑的色譜柱推薦 0.3mL/min）。

• 色譜柱從液相儀器上取下前，需用不含任何鹽或緩沖溶液的流動相（例如水/異丙醇 90:10 (v/v)）沖洗。

• 色譜柱保存溶液，推薦使用水/異丙醇 85/15(v/v)。

  短時間保存，可置于室溫 (<30°C)下。

  長時間保存，需放置在冰箱內冷藏。

注意事項：

建議使用 CHIRALPAK® AGP 專 用 保護柱，可減輕分析柱被一些對固定相有強保留的顆粒或雜質的污染。保護柱需定期更換，尤其是做生物樣品分析。

換算表：

色譜柱內徑/流速

壓力

※1 一包保護柱柱芯中含有2個柱芯。保護柱柱芯必 須 配合大賽璐保護柱柱套（貨號00081）一起使用。